酵母菌适用于高壓勻漿破碎技術
植物(wù)葉片适用于撞擊破碎法。
紅血球細胞适用于滲透壓沖擊破碎法。
動物(wù)内髒适用于低溫玻璃化破碎法。
(1)酸堿處理:調節ph值,改變蛋白(bái)質的荷電(diàn)性質,提高産物(wù)的溶解度。 (2)化學試劑處理:用表面活性劑或有機溶劑(甲苯)處理細胞,增大(dà)細胞壁的通透性,降低胞内産物(wù)的相互作用,使之容易釋放(fàng)。 (3)酶溶:利用溶解細胞壁的酶處理菌體(tǐ)細胞,使細胞壁受到部分(fēn)或完全破壞後,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一(yī)步增大(dà)胞内産物(wù)的通透性。 酶溶的優點:操作溫和,選擇性強,酶能快速地破壞細胞壁,而不影響細胞内含物(wù)的質量,但缺點是酶的費(fèi)用高,因而限制了它在大(dà)規模生(shēng)産中(zhōng)的應用。 化學滲透法與機械破碎法相比:速度低,效率差,且化學或生(shēng)化試劑的添加形成新的污染,給進一(yī)步的分(fēn)離(lí)純化增添麻煩。但化學滲透法選擇性高,胞内産物(wù)的總釋放(fàng)率低,可有效抑制核酸的釋放(fàng),料液粘度小(xiǎo),有利于後處理。
1、高速組織搗碎
将材料配成稀糊狀液,放(fàng)置于筒内約1/3體(tǐ)積,蓋緊筒蓋,将調速器先撥至最慢(màn)處,開(kāi)動開(kāi)關後,逐步加速至所需速度。此法适用于動物(wù)内髒組織、植物(wù)肉質種子等。
2、玻璃勻漿器勻漿
先将剪碎的組織置于管中(zhōng),再套入研杆來回研磨,上下(xià)移動,即可将細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機爲高,适用于量少和動物(wù)髒器組織。
3、超聲波處理法
用一(yī)定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂,此法多适用于微生(shēng)物(wù)材料,用大(dà)腸杆菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體(tǐ)/毫升濃度,在1kg至10kg頻(pín)率下(xià)處理10-15分(fēn)鍾,此法的缺點是在處理過程會産生(shēng)大(dà)量的熱,應采取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用。
細胞共性
1、所有的細胞表面均有由磷脂雙分(fēn)子層與鑲嵌蛋白(bái)質及糖被構成的生(shēng)物(wù)膜(注意:癌細胞無糖被,容易遊走擴散),即細胞膜。
2、所有的細胞都含有兩種核酸:即dna與rna。
3、作爲遺傳信息複制與轉錄的載體(tǐ)。
4、作爲蛋白(bái)質合成的機器——核糖體(tǐ),毫無例外(wài)地存在于一(yī)切細胞内。核糖體(tǐ),是蛋白(bái)質合成的必須機器,在細胞遺傳信息流的傳遞中(zhōng)起着必不可少的作用。